小鼠免疫球蛋白M(IgM)酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：0.1ng/ml - 4ng/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中免疫球蛋白 M(IgM)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)水平。用純化的抗原包

被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白 M(IgM)，再與 HRP 標記

的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB

在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中

的免疫球蛋白 M(IgM)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標

準曲線計算樣品中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)濃度。

試劑盒組成

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止液

6ml×1 瓶

2

酶標試劑

6ml×1 瓶

8

標準品（8ng/ml）

0.5ml×1 瓶

3

酶標包被板

12 孔×8 條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說明書

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 張

6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.

標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行

稀釋。

4ng/ml

5 號標準品

150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2ng/ml

4 號標準品

150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

1ng/ml

3 號標準品

150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

0.5ng/ml

2 號標準品

150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

0.25ng/ml

1 號標準品

150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底

部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.

配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6.

加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.

溫育：操作同 3。

8.

洗滌：操作同 5。

9.

顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終

止液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出

標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD

值大于標準品孔D一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，

計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月