由于以漸近線開始和結束，曲線范圍之外的數據可能會產生不的結果。更進一步說，試著在S中間標準曲線的線性范圍內工作。一般來說，未知計算在曲線的線性范圍內更。可以稀釋超出標準曲線范圍的樣本，根據標準曲線計算濃度，然后根據初始稀釋值乘以相應倍數。做ELISA標準曲線需要注意事項如下：

　　1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。

　　2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。

　　3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

　　4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高性。

　　5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。

　　6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。