ELISA測(cè)定的陽(yáng)性判斷值,通常是將大量陰性和陽(yáng)性人群的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽(yáng)性和假陰性率低。在陽(yáng)性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”。“灰區(qū)”的大小可用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定。測(cè)定結(jié)果處于“灰區(qū)”的樣本,可通過(guò)確認(rèn)試驗(yàn)或追蹤檢測(cè)來(lái)確定到底是陽(yáng)性還是陰性ELISA“灰區(qū)”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。

　　目前各種形式的ELISA自動(dòng)分析儀已經(jīng)進(jìn)入市場(chǎng),如廣泛應(yīng)用于血站系統(tǒng)的微板式全自動(dòng)酶免分析儀,其試劑為開(kāi)放式的,而對(duì)于其它類型的,則試劑和儀器往往是配套的。但當(dāng)前大部分醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室均采用手工操作加儀器測(cè)定的方式。ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。以下敘述各個(gè)步驟中的影響因素。加樣器是一種比較精密的工具,其在長(zhǎng)時(shí)間使用時(shí)會(huì)因機(jī)械磨損或者推動(dòng)桿內(nèi)附著血痂等原因造成加樣不準(zhǔn),尤其是對(duì)于樣本量較大的臨床實(shí)驗(yàn)室,因此必須定期對(duì)加液器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。每次加不同的標(biāo)本時(shí)均需更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染。加樣時(shí)速度不可太快,避免將標(biāo)本加在孔壁上部,并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)還應(yīng)當(dāng)注意操作時(shí)差對(duì)結(jié)果的影響,操作時(shí)差是指加入標(biāo)本、試劑及混勻時(shí)間的差異。操作時(shí)差在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中都存在,尤其是手工操作,日常檢測(cè)標(biāo)本多達(dá)幾百個(gè),從加入標(biāo)本到后一個(gè)標(biāo)本,需幾十分鐘,加入試劑及混勻等均存在著前后時(shí)間差異,使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時(shí)間不一致,操作時(shí)差對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)的結(jié)果影響更大,在加酶結(jié)合物和底物時(shí)可用定量多道。